磁珠富集法分离草鱼微卫星分子标记
2005-08-30分类号:S965.112
【部门】中国水产科学研究院黑龙江水产研究所 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所 黑龙江哈尔滨150070 黑龙江哈尔滨150070大连水产学院生命科学与技术学院 辽宁大连116023 黑龙江哈尔滨150070
【摘要】磁珠富集法是一种快速、高效的分离微卫星分子标记的方法。本研究通过该方法分离草鱼的微卫星分子标记。将草鱼(Ctenopharyngodon idella)基因组DNA经Sau3AI酶切,回收纯化400~900bp片段,连上接头,构建“基因组PCR文库”。用生物素标记的简单重复序列(CA)15作探针与其杂交,杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上,经一系列的洗涤过程,去除磁珠表面不含有微卫星的片段。将吸附在磁珠上的片段洗脱,PCR扩增放大,再进行克隆和测序,根据微卫星两端的保守序列设计引物,即可得到微卫星分子标记。本研究又通过同位素标记的探针(CA)15进行二次杂交筛选,获得阳性克隆132个,所...
【关键词】磁珠富集 草鱼 微卫星分子标记
【基金】国家重大基础研究资助项目(2004CB117405)
【所属期刊栏目】水产学报
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