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黑龙江镜鲤基因组DNA文库的构建

2004-06-30分类号:Q953

【作者】杨亮亮  孙效文
【部门】上海水产大学生命科学与技术学院  中国水产科学研究院黑龙江水产研究所 上海 200090  中国水产科学研究院黑龙江水产研究所  黑龙江 哈尔滨 150070   黑龙江 哈尔滨 150070
【摘要】纯化镜鲤体组织的高分子量基因组DNA,经限制性内切酶Sau3A Ⅰ部分消化后,10%-40%蔗糖密度梯度离心分离并回收9—23kb的DNA片段。以λDASHⅡ为克隆载体,与9—23kb的DNA片段进行连接和包装,构建了镜鲤的基因组DNA文库。随机选取5个独立的噬菌斑,提取DNA后用EcoR Ⅰ与BamH Ⅰ进行酶切分析,证明克隆插入率为100%。经测定,该文库的滴度是108pfu/mL,根据公式N=ln(1-P)/In(1-f),99%的镜鲤基因组包含在该基因组文库中。以鲤IGF-Ⅱ基因探针对该基因组文库进行Southem杂交,筛选到相关的阳性克隆,证明这是一个较为完整的镜鲤基因组DNA文库。
【关键词】镜鲤  基因组  DNA文库
【基金】
【所属期刊栏目】上海水产大学学报
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