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水疱性口炎病毒N基因原核表达载体的构建及表达

2004-05-25分类号:S852.659.1

【作者】郑增忍  王海霞  龚振华  张彦明  李葳  刘俊辉
【部门】西北农林科技大学动物科技学院  西北农林科技大学动物科技学院  农业部动物及动物产品卫生质量监督检验测试中心  西北农林科技大学动物科技学院  农业部动物及动物产品卫生质量监督检验测试中心  农业部动物及动物产品卫生质量监督检验测试中心 陕西杨凌712100农业部动物及动物产品卫生质量监督检验测试中心山东青岛266032   陕西杨凌712100   山东青岛266032   陕西杨凌712100   山东青岛266032   山东青岛266032
【摘要】 针对水疱性口炎病毒(VSV)N基因设计特异性引物,在引物中分别加入EcoR 和Xho 酶切位点。RT-PCR扩增后得到目的基因,将其克隆到表达载体pET30c,连接产物转化于DH5α菌株,在含Kan+的平板上37℃培养24h,然后挑取白色菌落,鉴定为阳性者,转化于BL21菌株,再经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导获得高效表达。表达融合蛋白分子质量为53ku(目的蛋白大约47ku),同预期蛋白大小相近。Westernblot检测表明,其能与本病毒阳性血清发生特异性反应,表达蛋白有望成为有价值的VSV诊断抗原。
【关键词】水疱性口炎病毒  N基因  原核表达载体
【基金】农业部外来病研究项目(动物疫情监测与防治经费科目编码:070104)
【所属期刊栏目】西北农林科技大学学报(自然科学版)
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