斜带石斑鱼生长激素cDNA克隆及其在大肠杆菌中的融合表达
2003-10-30分类号：Q785
【部门】中山大学生命科学学院水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁育重点实验室 中山大学生命科学学院水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁育重点实验室 中山大学生命科学学院水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁育重点实验室 中山大学生命科学学院水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁育重点实验室 中山大学生命科学学院水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁育重点实验室 广东广州 510275 广东广州 510275 广东广州 510275 广东广州 510275 广东广州 510275
【摘要】通过构建斜带石斑鱼垂体cDNA文库,克隆了其生长激素(GH)全长cDNA。斜带石斑鱼GH全长cDNA为955bp,编码的多肽为204aa。应用PCR方法把编码GH成熟肽的cDNA片段克隆到表达载体pET-15b,在大肠杆菌BL21(DE3)表达N端含6个组氨酸的融合多肽。SDS-PAGE结果表明,0.4mmol·L-1IPTG诱导表达的蛋白约为24kDa,主要为不溶性的包含体。细菌裂解液沉淀溶于6mol·L-1盐酸胍后,用Ni2+-NTA树脂进行亲和分离纯化,纯化产物在SDS-PAGE上表现为一条24kDa的蛋白带。在黑鲷GH放射免疫分析系统中,纯化产物能与黑鲷GH竞争结合GH抗体,表明大肠杆...
【关键词】斜带石斑鱼 生长激素 克隆 表达
【基金】国家高新技术计划 (86 3 )海洋生物功能基因组开放实验室项目 ; 国家自然科学基金项目 (No.30070598); 广东省自然科学基金项目(001261)
【所属期刊栏目】水产学报
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