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一种嗜热菌Pif1解旋酶的表达纯化及活性分析

2015-12-02分类号:Q936;Q78

【作者】赵正阳  刘娜女  李海红  奚绪光  范三红
【部门】
【摘要】【目的】利用大肠杆菌表达纯化嗜热脱铁去硫弧菌(Deferribacter desulfuricans)解旋酶DePif1,并对其结合与解旋DNA的活性进行分析,为Pif1家族解旋酶结构和功能的阐明奠定基础。【方法】将促溶标签SUMO编码序列和人工合成的DePif1解旋酶编码序列依次连入pET15b载体,获得重组融合表达载体pET15bSUMODePif1,然后将其导入E.coli BL21(DE3)菌株进行诱导表达;利用NiNTA亲和层析柱获得融合蛋白,SUMO蛋白酶酶切去除融合标签,再经Heparin和NiNTA柱分离获得无标签的纯化重组DePif1蛋白;采用荧光各向异性分析,研究pH和Na...
【关键词】嗜热脱铁去硫弧菌  Pif1解旋酶  G4DNA  表达纯化  解旋活性
【基金】
【所属期刊栏目】西北农林科技大学学报(自然科学版)
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