半滑舌鳎vstm2a基因的响应细菌感染的表达模式和功能的研究
2024-07-05分类号:S943
【部门】上海海洋大学水产与生命学院 海水养殖生物育种与可持续产出全国重点实验室(中国水产科学研究院黄海水产研究所) 青岛海洋科技中心海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 中国海洋大学海洋生命学院
【摘要】为了探究半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)vstm2a基因响应细菌感染的表达特征和其蛋白功能。本研究采用实时荧光定量(RT-qPCR)检测哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)和无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染半滑舌鳎后免疫组织(鳃、肝脏、脾脏、肠道和肾脏)中vstm2a的相对表达特征;构建vstm2a基因原核表达重组质粒,获得重组蛋白,采用牛津杯法、细菌蛋白结合实验和siRNA沉默等,探究vstm2a蛋白在细菌入侵中的功能。结果显示:vstm2a蛋白具有跨膜结构域和Ig结构域,在细胞表面行使功能;相关免疫组织中的vstm2a基因的表达量在哈维氏弧菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、迟缓爱德华氏菌和无乳链球菌感染半滑舌鳎后6 h、48 h和72 h显著升高;vstm2a重组蛋白与细菌孵育后,经过低速离心与细菌共同沉淀;抑菌实验显示其显著抑制细菌的生长,并且siRNA降低vstm2a基因后,抑制了细胞因子IL-6和IL-10等基因的表达。本研究证明了vstm2a蛋白响应细菌入侵,可以识别和结合细菌,通过抑制细菌生长和激活促炎症细胞因子,对病原菌的侵染起到免疫防御作用,是一种重要的免疫蛋白。本研究有助于解析细菌粘附细胞或鱼体抵抗细菌入侵的机制,为未来的采用分子手段选育抗性品种提供一定的理论基础。
【关键词】半滑舌鳎 免疫 vstm2a 跨膜蛋白,细菌结合
【基金】山东省重点研发计划项目(2021LZGC028);山东省重点研发计划住鲁院士团队支持项目(2023ZLYS02);; 国家重点研发计划(2022YFF1000303);; 国家海水鱼产业技术体系半滑舌鳎岗位项目(CARS-47-G03);; 中国水产科学研究院创新团队项目(2023TD20);; 山东省泰山学者攀登计划项目(2017)
【所属期刊栏目】上海海洋大学学报
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