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刺参TRAF7基因克隆及其响应高温胁迫下的表达特征分析

2024-05-08分类号:S917.4

【作者】赵岩峰   廖梅杰   葛建龙   王锦锦   王印庚   荣小军   李彬   谭颜廷
【部门】上海海洋大学水产与生命学院  中国水产科学研究院黄海水产研究所农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室  青岛海洋科技中心海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室  
【摘要】肿瘤坏死因子受体相关因子7 (tumor necrosis factor receptor associated factor7, TRAF7)作为一种细胞内蛋白,参与信号转导,并介导宿主应激防御调控过程。为研究TRAF7在刺参(Apostichopus japonicus)高温胁迫中的作用,本研究利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)和实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR),克隆了刺参TRAF7 (AjTRAF7)全长cDNA序列,分析了其结构特征和在基因组中的分布,并检测了该基因在刺参不同组织和高温胁迫过程中体壁组织中的表达变化情况。结果显示,AjTRAF7全长2 576 bp,开放阅读框(ORF)长1 770 bp,5′UTR长345 bp,3′UTR长461 bp,编码589个氨基酸,预测蛋白分子量为65.6 kDa,理论等电点(pI)为7.52。蛋白序列包含1个RING finger结构域、1个Coiled coil结构域和6个WD40结构域,N端包含1个螺旋区域。该基因预测蛋白包含41个丝氨酸磷酸化位点、20个苏氨酸磷酸化位点和3个酪氨酸磷酸化位点,蛋白N端具有3个天冬酰胺糖基化位点。刺参基因组中比对到2个AjTRAF7基因拷贝,位于同一条染色体上,第一个拷贝包含18个外显子和15个内含子,第二拷贝包含17个外显子和14个内含子。系统进化学分析表明,刺参TRAF7氨基酸序列与蝠海星(Patiria miniata)和紫色球海胆(Strongylocentrotus purpuratus)相似性较高,分别为40.58%和38.37%,刺参与蝠海星和紫色球海胆聚在一支。qRT-PCR结果显示,AjTRAF7在健康刺参各组织中均有表达,其在雌性性腺中表达量最高,体腔细胞中表达量次之,在呼吸树、体壁、肠道、雄性性腺和纵肌中表达量依次降低,各组织间表达量差异显著(P<0.05)。在响应高温胁迫的过程中,与对照组相比,体壁组织中AjTRAF7基因表达量在第2天和第4天表达显著上升(P<0.05),第6天基因表达开始下降。综上,AjTRAF7基因可能参与刺参应对高温胁迫的表达调控过程,相关结果将为解析刺参应对高温胁迫的分子机制提供科学依据。
【关键词】刺参  TRAF7  高温胁迫  基因克隆  表达特征
【基金】山东省重点研发计划(2023LZGC019);; 中国水产科学研究院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(2020TD40);; 青岛市重点研发计划课题(22-3-3-hygg-1-hy)共同资助
【所属期刊栏目】渔业科学进展
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