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猪源CXCL17的原核表达及其对猪巨噬细胞的趋化作用

2024-04-19分类号:S852.4

【作者】齐佳欣   钟秋   刘芮伶   郑健   李昱辰   杨倩
【部门】南京农业大学动物医学院  
【摘要】[目的] 本研究旨在探究CXC趋化因子配体17(C-X-C motif chemokine ligand 17,CXCL17)对巨噬细胞的趋化作用并解析其涉及的分子机制。[方法] 首先,本研究构建表达猪CXCL17蛋白的重组菌,该菌经IPTG诱导后高效的表达CXCL17蛋白,并主要以包涵体形式存在;包涵体经过变性、纯化和复性获得重组蛋白,利用SDS-PAGE和Western blot对纯化的CXCL17蛋白进行验证。其次,通过CCK-8法筛选CXCL17蛋白的最佳浓度范围,并以该浓度设置浓度梯度处理猪巨噬细胞,通过Transwell试验检测CXCL17对巨噬细胞的趋化活性;最后,通过免疫荧光和Western blot检测细胞微丝骨架的变化及相关通路的激活情况,以揭示CXCL17趋化巨噬细胞迁移的作用机制。[结果] 研究发现,重组菌在IPTG终浓度为1.0 mmol·L~(-1),37℃诱导表达7 h的条件下,能够获得高表达量的重组猪CXCL17蛋白。该蛋白经纯化后纯度可高达95%。使用该重组猪CXCL17蛋白可以剂量依赖的诱导猪巨噬细胞迁移,其主要的机制为通过激活微丝骨架下游的LIMK/Cofilin信号通路引起细胞微丝骨架重排,促进细胞微丝骨架的解聚、聚合,从而有利于巨噬细胞的迁移。[结论] 本研究制备了重组猪CXCL17蛋白,并探究了CXCL17调控细胞微丝骨架诱导猪巨噬细胞迁移的分子机制,为CXCL17作为黏膜免疫增强剂提供理论依据。
【关键词】CXCL17  原核表达  巨噬细胞  迁移  黏膜免疫
【基金】江苏省自然科学基金-青年项目(BK20200536)
【所属期刊栏目】南京农业大学学报
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