日本落叶松瞬时转化体系的优化及初步应用
2024-06-15分类号:S791.223
【部门】林木遗传育种全国重点实验室 东北林业大学 林木遗传育种全国重点实验室 国家林草局林木培育重点实验室 中国林业科学研究院林业研究所 山西农业大学
【摘要】[目的]优化农杆菌介导的日本落叶松胚性愈伤组织瞬时转化体系。[方法]以液体增殖培养7 d的日本落叶松胚性愈伤组织为受体材料,利用携带β-葡糖醛酸酶基因(GUS)的pCAMBIA1305.1载体进行瞬时转化,根据GUS的表达量及酶活性,筛选最佳侵染液浓度、侵染时间和共培养时间。并利用筛选出的转化体系,分析落叶松scarecrow-like 6(LaSCL6)启动子的活性。[结果]瞬时转化后,GUS表达明显。当侵染液浓度OD_(600)为0.2,侵染5 min,共培养72 h时,GUS的表达量最高,△C_T值为-2.274 2;当侵染液浓度OD_(600)为0.05,侵染5 min,共培养72 h时,GUS酶活性最高,为25.728 6 U·L~(-1)。LaSCL6启动子的活性是CaMV35S启动子的1.55倍。[结论]综合考虑GUS的表达量和酶活性,当侵染液浓度OD_(600)为0.05,侵染5 min,共培养24 h时,GUS的表达量和酶活性较高,这一条件可以用来进行日本落叶松胚性愈伤组织的高效转化。
【关键词】落叶松 瞬时转化 胚性愈伤组织 GUS 启动子
【基金】国家自然科学基金面上项目“落叶松miR171-LaSCL6调控体胚发生的分子机理”(32271904)
【所属期刊栏目】林业科学研究
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