【摘要】【目的】探明普通烟草β-半乳糖苷酶基因NtBGAL的表达模式与蛋白特征，为后期创制烟草多用途利用的底盘材料提供依据。【方法】通过比对普通烟草K326的基因序列与本氏烟草NbBGAL1基因的同源性，以K326的cDNA为模板经PCR技术克隆获得NtBGAL基因，随后利用生信工具软件分析其基因结构及蛋白理化性质，并采用qRT-PCR检测该基因在烟草不同组织部位（根、茎、叶和花）的表达模式，最后开展了原核诱导表达、蛋白纯化及蛋白表征研究。【结果】克隆获得烟草NtBGAL基因，其与本氏烟草NbBGAL1基因同源性最高，二者具有相同的结构域（Motif）；该基因定位于9号染色体上，含有18个内含子，mRNA长度为6 649 bp，CDS长度为2 541 bp，编码846个氨基酸，翻译的β-半乳糖苷酶属于GH35家族，NtBGAL蛋白的分子量为92.44 kDa，理论等电点（pI）为6.8，GRAVY为－0.222，定位于细胞壁。该基因在普通烟草不同组织部位的表达量为花＞叶＞茎＞根，差异显著。在37 ℃下进行原核诱导，NtBGAL蛋白有明显表达；采用包涵体纯化方法获得较高纯度的NtBGAL蛋白。NtBGAL蛋白酶促反应最适温度为30～40 ℃，最适pH为4.0～6.5，Mn~(2＋)浓度为0.05～0.15 mmol/L时对NtBGAL酶活性有增强作用。【结论】研究明确了NtBGAL基因的组织表达模式及蛋白表征，为进一步通过改造NtBGAL基因，利用普通烟草生产人源化糖蛋白奠定了基础。