【摘要】【目的】远缘杂交可以实现有利基因的聚合，是种质创新的重要手段。杨属有些派间杂交困难，且杂交子代从形态学难以区分，本研究开发杨属不同派间的特异性引物，为派间杂交创制新种质的真实性鉴定提供技术支撑。【方法】利用在美洲黑杨和小叶杨中种特异性InDel位点设计引物，并利用SeqHunter2依次比对胡杨、山杨、小叶杨和大叶杨基因组，再用杨属5个派的自然群体材料进行种内保守及种间多态引物的试验验证，筛选出杨属不同派的特异性引物序列，对杨属不同派间杂交子代进行真实性鉴别。【结果】将从美洲黑杨基因组设计的5 000对InDel引物依次分别比对胡杨、山杨、小叶杨和大叶杨基因组，最后筛选出341对引物在上述5个种中是通用的。从不同染色体上共选取48对引物并合成，利用5个树种各1个DNA检测得到43对引物是通用的，其中19对引物在不同种中扩增条带单一且存在差异。利用自然群体混合DNA对试验验证的19对通用引物进行种间多态性和种内保守性检测，初步获得4对多态性引物。最后再用自然群体DNA对这4对引物进行扩增检测，发现引物Chr12＿4341229和Chr13＿10582756在美洲黑杨、小叶杨、山杨、大叶杨和胡杨中均只能扩增出一个位点，引物Chr12＿4341229扩增条带分别为148、 152、 113、 152和159 bp，引物Chr13＿10582756扩增条带分别为140、 144、 116、140和159 bp。利用上述2对引物对小胡杨2号、黑胡杨和黑小杨进行鉴定，发现所有杂交子代个体均能检测它们2个亲本的特征带。引物Chr12＿4341229和Chr13＿10582756一起使用，可以用于美洲黑杨、小叶杨、山杨、大叶杨和胡杨任意组合杂交子代的真实性鉴别。【结论】本研究获得了杨属5个派间的5个种的特异性InDel引物2对，可以有效地进行杨属不同派5个种之间任意组合种间杂交子代的真实性鉴别，为进一步开展杨树派间杂交创制新种质提供了技术支持。