【摘要】【目的】探究不同有益菌剂对长期连作烤烟根际土壤微生态环境的影响，为连作土壤改良及连作障碍消减提供参考依据。【方法】采用盆栽试验和高通量测序技术，分析长期连作烤烟后添加有益菌哈茨木霉菌剂T-22（T1处理）、枯草芽孢杆菌剂（T2处理）、哈茨木霉菌剂T-22+枯草芽孢杆菌剂（T3处理）的烤烟根际土壤理化性质、酶活性及微生物群落结构和功能。【结果】相较于不施有益菌（对照，CK），施用有益菌剂可提高长期连作烤烟根际土壤的速效养分含量和酶活性，其中，在10个环境因子中，速效磷（AP）含量对烤烟根际土壤细菌群落分布的贡献度（4.97%）最高，碱解氮（AN）含量对烤烟根际土壤真菌群落分布的贡献度（6.91%）最高，蔗糖酶（SC）活性对烤烟根际土壤真菌群落分布的贡献度（6.75%）次之；可提高长期连作烤烟根际土壤微生物群落丰度、多样性指数和细菌特有OTUs数；可改变长期连作烤烟根际土壤的指示物种丰度，其中，细菌假单胞菌属（Pseudomonas）为T1处理的指示物种，鞘氨醇单胞菌属（Sphingomonas）和被孢霉属（Mortierella）为T1处理的优势菌属，丰度分别为12.2%和25.0%，Minimedusa属为T3处理的指示物种。单施细菌有益菌剂可降低长期连作烤烟根际土壤细菌群落主要代谢途径的丰度，单施真菌有益菌剂则相反；单施真菌、细菌与真菌有益菌剂混施可提高烤烟根际土壤真菌代谢途径的丰度。【结论】施用有益菌剂对长期连作烤烟根际土壤微生态环境具有一定的改良效应，其中，哈茨木霉T-22的施用效果较好，可用于烤烟连作障碍防控。