猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白特异性纳米抗体的筛选与鉴定研究
2024-02-20分类号:S852.4
【部门】江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心/江苏省食品质量与安全重点实验室 南京农业大学动物医学院 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心 河南祺祥生物科技有限公司 中国热带农业科学院广州实验站
【摘要】[目的]猪CD205分子作为猪DC细胞特异性的抗原提呈受体,在抗原提呈过程中起到关键作用。本研究通过噬菌体展示技术针对猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白进行筛选获得其特异性的纳米抗体,为猪CD205靶向抗原提呈的研究奠定基础。[方法]利用前期制备的猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白进行羊驼免疫,经6次皮下免疫后,采集羊驼外周血淋巴细胞,提取总RNA并反转录获得cDNA,经PCR扩增编码纳米抗体的基因片段,构建猪CD205分子CysR-FN Ⅱ噬菌体展示纳米抗体基因文库,并运用噬菌体展示技术针对猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白进行亲和筛选,随机挑选单克隆菌落并使用Phage-ELISA方法鉴定出针对猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白的特异性纳米抗体。[结果]4轮亲和筛选后,通过Phage-ELISA方法鉴定和序列比对分析,共获得12个猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白特异性纳米抗体,相对分子质量在17 × 10~(3)左右。[结论]本研究成功筛选获得猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白特异性的纳米抗体,为下一步研究构建CD205靶向抗原以及CD205靶向研究奠定了基础。
【关键词】猪 CD205 CysR-FNⅡ 纳米抗体 噬菌体展示
【基金】国家自然科学基金项目(32102690);; “十四五”重点研发专项(2022YFD1800800)
【所属期刊栏目】南京农业大学学报
文献传递