【摘要】为摆脱常规核酸样品提取步骤繁琐、耗时等问题，实现真正的现场快速检测，本研究致力于研制和优化一种适用于重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplication， RPA)与侧向流层析试纸条技术(lateral flow dipstick， LFD)结合的RPA-LFD技术的检测对虾肝胰腺中DNA样品的核酸快速制备试剂，即核酸释放剂。实验优选20～100 mmol/L Tris-HCl、50～250 mmol/L KCl、0.01%～0.10% 十二烷基硫酸锂(LDS)、0.5%～2.0%聚乙二醇辛基苯基醚(TristonX-100)、1～5 mmol EGTA_(2)Na、0.5～5.0 mmol/L牛血清白蛋白(BSA)、1～5 mg/mL明胶(gelatin)、0.01～0.10%海藻糖(trehalose)、1%～5%甜菜碱(betaine)等配制成核酸释放剂。以对虾肝肠孢虫(Enterocytozoon hepatopenaei， EHP)阳性样本和阴性样本对核酸释放剂各组分间配比进行优化，采集绿豆大小的对虾肝胰腺组织加入100 μL核酸释放剂，100 ℃加热3 min，取上清液进行RPA-LFD反应，测试各组分不同浓度配比。并以对虾急性肝胰腺坏死病(acute hepatopancreatic necrosis disease， AHPND)阳性样品及阴性样品作为检测模板对优化后核酸释放剂进行了再次验证结果显示，核酸释放剂的各组分最佳配比为100 mmol/L Tris-HCl、100 mmol/L KCl、0.02% LDS、0.5% TristonX-100、1 mmol/L EGTA_(2)Na、0.05%海藻糖、1 mg/mL明胶、0.5 mmol/L BSA、2%甜菜碱。经RPA-LFD方法检测可显著区分阳性和阴性样品。本研究优化的核酸释放剂，可适用于RPA-LFD检测对虾肝胰腺病原DNA样品的制备，有效避免了常规DNA样品繁琐、耗时的制备步骤，极大提高了核酸水平病原检测效率。