【摘要】为评价大黄鱼杀香鱼假单胞菌外膜蛋白Tol C（GenBank：EPB97112.1）的免疫保护效果，通过原核表达获得重组的Tol C功能域蛋白，命名为B6。用兔抗杀香鱼假单胞菌多抗血清对B6进行免疫原性的初步检测。将B6与明矾佐剂混合制成亚单位疫苗，腹腔注射免疫大黄鱼，免疫4周后攻毒，检测相对保护率（relative percent survival，RPS）；同时，采集免疫后第2、4、6、8周的鱼血清和头肾、脾脏，测定血清抗体效价和免疫相关基因的表达变化；采集健康和攻毒后个体的头肾和脾脏，制成石蜡切片，观察组织病理变化。结果表明，B6分子量为22 ku。Western blot结果显示，杀香鱼假单胞菌兔抗血清与B6具有强结合条带。接种B6亚单位疫苗4周后，RPS达72.22%。ELISA结果显示，免疫后第2周起，血清抗体效价显著升高，第4周时达到峰值（log2 8.65），随后略有下降，第8周时降至log2 6.98。RT-PCR结果表明，免疫后第2、4、6、8周，头肾和脾脏中免疫相关基因均有不同程度的表达上调，其中IL-1β和MHC Ⅰ α的上调幅度最大，头肾中分别达到93.33倍和77.02倍，脾脏中分别达到241.13倍和131.95倍。除CD8外，IgM、IL-1β、CD4、MHC Ⅰ α、MHC Ⅱ β在脾脏中的表达上调幅度均高于头肾。石蜡切片显示，PBS对照组在攻毒后头肾和脾脏中出现严重的出血点和结节，并伴随不同程度的铁黄素沉积，B6免疫组在头肾和脾脏中仅有少量出血点，无结节和铁黄素沉积。综上，本研究对大黄鱼杀香鱼假单胞菌外膜蛋白Tol C进行了原核表达和免疫保护效果评价，结果表明B6具有良好的免疫原性，免疫后4周RPS达72.22%，具有作为亚单位候选疫苗的潜力。