【摘要】为了探索表皮酚氧化酶原激活因子 (prophenoloxiase activating factors，PPAFs) 在甲壳动物免疫反应中的功能，基于前期转录组数据，本实验利用PCR和RACE技术从日本沼虾表皮克隆并鉴定了一个新的PPAF基因，命名为MnPPAF1 (GenBank登录号为OP784577)，利用生物信息学、实时荧光定量PCR (qPCR) 和RNAi等方法，研究了该基因序列特征、时空表达模式、嗜水气单胞菌攻毒后表皮MnPPAF1的转录水平、酚氧化酶 (phenoloxidase，PO) 活性以及日本沼虾死亡率的变化。结果显示，MnPPAF1 cDNA全长1 718 bp，编码460个氨基酸，具有夹子结构域丝氨酸蛋白酶 (clip-domain serine proteinases，Clip-SPs) 和胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶 (trypsin-like serine proteases，Tryp-SPs) 结构域。MnPPAF1在腹背部的表皮、血细胞、鳃、胃、心、肝胰腺等多种组织均有表达；表皮MnPPAF1的表达与蜕皮周期有关，与蜕皮间期 (C期) 相比，蜕皮前晚期 (D_(4)期) MnPPAF1表达量增加857%。嗜水气单胞菌攻毒后，表皮MnPPAF1表达水平在6 h达到了峰值，比对照组增加227%，而表皮PO活性在12 h达到峰值，同比增加24%。在腹背部第2节注射3 μg dsRNA溶液，每12 小时注射1次，共注射3次，最后1次注射后12 h，干扰效率最高，表皮MnPPAF1表达同比下降71.79%，至24 h，表皮PO活性降低72.31%。在干扰效率最高的时间点攻毒，在120 h，攻毒+干扰组虾的累计死亡率比攻毒+未干扰组增加26%。结果表明，MnPPAF1是表皮重要的免疫因子，参与调节酚氧化酶原系统的激活，该基因表达下调能显著增加嗜水气单胞菌感染虾的死亡率。本研究为阐明表皮在甲壳动物免疫系统中的作用积累了资料。