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牛circMYH8的鉴定及其调控牛肌原代细胞增殖的功能探究

2023-08-28分类号:S823

【作者】岳炳霖   杨友抓拉母   冉宏标   王会   蔡欣   王嘉博   柴志欣   彭巍   舒适   付长其   王国文   钟金城
【部门】西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省教育部重点实验室  青海大学青海省畜牧兽医科学院  
【摘要】旨在鉴定牛circMYH8以及探究其对牛肌原代细胞增殖的调控作用。设计合成circMYH8的divergent primer及convergent primer 2组引物,分别以牛背最长肌cDNA、RNase R处理的牛背最长肌cDNA以及牛背最长肌gDNA为模板进行PCR扩增,通过测序及琼脂糖凝胶电泳进行环状RNA鉴定;对circMYH8进行不同发育时期骨骼肌RT-qPCR分析、核质分离试验以及RNase R耐受性试验;构建及合成circMYH8的过表达载体及干扰片段,并转染至牛肌原代细胞中,通过RT-qPCR、Western Blot、EdU、流式细胞术等手段探究了circMYH8对牛肌原代细胞增殖表型的影响。结果表明,测序及琼脂糖凝胶电泳证实circMYH8为环状RNA;RT-qPCR分析显示,circMYH8在牛骨骼肌发育早期高表达,核质分离试验结果显示,circMYH8在细胞核和细胞质中都有表达,RNase R耐受性试验表明,circMYH8的稳定性高于其线性转录物;过表达circMYH8抑制了增殖标志基因的表达,EdU活性降低,而抑制circMYH8促进了增殖标志基因的表达,EdU活性上升,S期细胞比例上升。结果表明,牛circMYH8能显著抑制牛肌原代细胞增殖。
【关键词】牛circMYH8  骨骼肌  细胞增殖
【基金】西南民族大学中央高校基本科研业务费专项资金项目(ZYN2022087);; 青海省科技计划项目(2022-NK-110);; 国家肉牛牦牛产业技术体系建设项目(CARS-37);; 国家自然科学基金(31902153);; 四川省科技计划项目(2021YJ0266)
【所属期刊栏目】华北农学报
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