【摘要】【目的】本文研究Ⅹ蛋白（Protein Ⅹ，pⅩ）在血清4型禽腺病毒（Fowl Adenovirus Serotype 4，FAdV-4）感染LMH细胞后对Toll样受体产生的影响，为进一步阐释FAdV-4感染致病机制和免疫应答机理提供数据参考。【方法】通过PCR扩增X基因编码区序列，与pEF1α-HA载体连接，构建重组表达质粒pEF1α- HA-X。将重组表达质粒pEF1α-HA-X和空质粒pEF1α-HA分别转染LMH细胞，24 h后用FAdV-4感染转染后的细胞，2个处理组分别标记为pEF1α-HA-X+和pEF1α-HA+；同时设立转染后未加病毒刺激组作对照，分别标记为pEF1α-HA-X-和pEF1α-HA-。用Western-blotting和间接免疫荧光验证重组蛋白表达情况，实时荧光定量PCR检测Toll样受体（chTLR1a、chTLR1b、chTLR2a、chTLR2b、chTLR3、chTLR4、chTLR5、chTLR7、chTLR15、chTLR21）和效应因子（IFN-α、IFN-β、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-15）mRNA转录水平的变化。【结果】X基因开放阅读框（ORF）全长540 bp，共编码179个氨基酸残基。Western-blotting结果显示重组X蛋白与HA标签小鼠源单克隆抗体反应，在27 kD处得到单一条带，间接免疫荧光结果可见绿色荧光。实时荧光定量PCR检测发现，与pEF1α-HA-组相比较，pEF1α-HA-X-组chTLR1a和chTLR1b的mRNA转录水平极显著上调（P<0.01，下同），分别为pEF1α-HA-组的9.76和12.34倍；chTLR2a、chTLR2b、chTLR5、chTLR7、chTLR15和chTLR21的mRNA转录水平显著上调（P<0.05，下同)。添加病毒感染后，与pEF1α-HA-X-组相比，pEF1α-HA-X+组chTLR1a和chTLR1b的mRNA转录水平极显著下调，分别下调60%和66.7%；chTLR2a、chTLR2b和chTLR3的mRNA转录水平显著提高，分别上调2.91、2.01和1.47倍（P<0.05），其他chTLRs的mRNA转录水平下调，但差异不显著（P>0.05）；同时，pEF1α-HA-X+组效应因子IFN-α、IFN-β、IL-1β的mRNA转录水平比pEF1α-HA-X-组显著上调，IL-8的mRNA转录水平极显著下调。【结论】在LMH细胞过表达pX并被FAdV-4感染后，pX能激活宿主免疫应答系统，Toll样受体（chTLR2a、chTLR2b和chTLR3）和其效应因子（IFN-α、IFN-β和IL-1β）的mRNA转录水平显著上调以抑制病毒复制，说明pX具备激活宿主细胞天然免疫系统的功能。