甲壳类和贝类原肌球蛋白的广谱单克隆抗体制备与鉴定
2023-06-06分类号:TS254.1
【部门】上海海洋大学食品学院 上海海洋大学水产品加工及贮藏工程技术研究中心 上海海洋大学农业农村部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室
【摘要】原肌球蛋白(Tropomyosin, TM)被认为是甲壳类和贝类的主要过敏原,为了应对与日俱增的甲壳类和贝类过敏风险,本研究以南美白对虾(Litopenaeus vannamei)的TM富集液为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术筛选获得1株南美白对虾过敏原TM的单克隆抗体细胞株2F8,并利用ELISA、Western Blot、生物信息学等方法对2F8单抗进行免疫学特性分析,确定其效价、特异性、抗体亚型、结合区域,以TM的特异性单抗2F8和兔多抗构建双抗夹心胶体金试纸条分析单抗2F8的应用可行性。结果显示,单抗2F8的抗体亚型为IgG_(1)型、效价为1.28×10~(5),抗体与TM抗原的IC_(50)值为20.21,亲和力高;纯化的单抗2F8可以特异性识别甲壳类、贝类和鱿鱼的主要过敏原TM,存在3个潜在的TM抗原结合区域AA_(0-31),AA_(38-43)和AA_(58-67)。制备的试纸条检测结果显示,该试纸条可在10 min内目测5 ng/mL的南美白对虾TM(相当于12.5 μg/kg),且可用于甲壳类和贝类肌肉中TM 的检测,研究表明所制备的2F8单抗亲和力高,可用于虾蟹贝和鱿鱼中的过敏原TM的鉴定与检测,具有较好的应用价值。本研究为过敏原TM的鉴定和检测提供了重要生物材料,也为今后TM的快速检测试剂盒开发提供了技术支持。
【关键词】原肌球蛋白 单克隆抗体 南美白对虾 甲壳类 贝类
【基金】国家自然科学基金面上项目(32172324);; 国家重点研发计划项目(2019YFD0902003)
【所属期刊栏目】上海海洋大学学报
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