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3型鲤疱疹病毒白介素10单克隆抗体制备与鉴定

2023-07-06分类号:S948

【作者】陈静  张艳维  刘琴  朱晓真  贾钊  王俊亚  高娃  贾智英  桂朗  邹钧  
【部门】上海海洋大学水产与生命学院  中国水产科学院黑龙江研究所  
【摘要】白介素(Interleukin,IL)10是 脊椎动物Th2细胞(T helper 2 cell)和先天淋巴细胞(Innate lymphoid cell)分泌的一种多效应细胞因子。3型鲤疱疹病毒(Cyprinid herpesvirus 3, CyHV3)ORF134编码IL10样蛋白,本研究构建了ORF134原核表达质粒,在大肠杆菌DE3感受态细胞中表达CyHV3-IL10重组蛋白。SDS-PAGE分析结果表明,重组CyHV3-IL10蛋白约为18 ku,主要以包涵体形式表达。将CyHV3-IL10包涵体进行变性和复性,经分子筛凝胶柱层析纯化获得了纯度较高的重组CyHV3-IL10蛋白,利用CyHV3-IL10重组蛋白免疫小鼠制备了单克隆抗体,通过酶联免疫吸附测定法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)筛选,获得了2株亲和力强的抗体,并利用激光共聚焦技术和Western blotting对抗体进行了鉴定。结果表明,FITC标记的单克隆抗体能够特异性识别HEK293细胞中表达的CyHV3-IL10重组蛋白和感染CyHV3的镜鲤脾和鳃组织中表达的CyHV3-IL10蛋白。CyHV3-IL10单克隆抗体的制备为后续研究CyHV3-IL10蛋白功能和建立CyHV3诊断方法奠定了基础,为CyHV3病毒检测试剂盒的研发提供了新思路。
【关键词】鲤疱疹病毒3型  白介素10  单克隆抗体  Western blotting  免疫荧光分析
【基金】国家自然科学基金(32030112)
【所属期刊栏目】上海海洋大学学报
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