【摘要】为了研究蛋白质的体外泛素化过程，利用大肠杆菌表达系统异源表达和纯化APPBP1/UBA3 (E1)、UBC12 (E2)、Cullin1-Rbx1 (E3)和Nedd8 (neural precursor cell expressed developmentally down-regulated protein 8)蛋白，制备FITC-Cysteine绿色荧光素标记的泛素Ub(Ubiquitin)，构建了SCF泛素连接酶的体外泛素化体系，同时实现快速检测SCF泛素连接酶中Cullin1蛋白的自泛素化修饰。结果表明，建立的体外SCF E3自泛素化活性反应体系具有较高的可操作性和便利性。