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鳗鲡圆环病毒SYBR Green Ⅰ qPCR检测方法的建立与应用

2023-05-15分类号:S943

【作者】林而舒  
【部门】福建省淡水水产研究所  
【摘要】为建立鳗鲡圆环病毒(Eel circovirus,EeCV)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,根据EeCV复制相关蛋白(replication-associated protein, RAP)基因的保守序列设计特异性引物,并评价其灵敏性、特异性、重复性和应用效果。qPCR的阈值循环数(Cycle threshold value,C_t值)与标准品的拷贝数线性关系良好,且线性范围广(1.0×10~8~10~2拷贝数/μL);可特异性检测EeCV,而对鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus)、猪圆环病毒(Porcine circovirus)、鸭圆环病毒(Duck circovirus)无扩增;重复性强,组内和组间变异系数均小于3%;灵敏性高于普通PCR法10倍。且qPCR检测后发现,在感染EeCV的鳗鲡体内重要器官均可检测到EeCV,其中鳃的病毒量显著高于其他组织;对保存的44份疑似鳗鲡病毒性感染病料进行检测,阳性检出率为98%,而普通PCR法的阳性检出率为73%。
【关键词】鳗鲡圆环病毒(Eel circovirus)  荧光定量PCR  SYBR GreenⅠ  检测方法
【基金】福建省公益类科研院所基本科研专项(2022R11010014-5,2023R11010017-4)
【所属期刊栏目】淡水渔业
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