【摘要】【目的】探索荧光显微观察澳洲坚果花粉管原位生长的最佳制片方法，为澳洲坚果品种间杂交（不）亲和性及生殖生物学研究提供技术支撑。【方法】以品种‘HAES842’为母本、‘HAES863’为父本，异花授粉5 d后，采集雌蕊为试验材料，经过固定、软化、染色、镜检等步骤，比较分析不同制片方法下澳洲坚果花粉管的荧光显微观察效果。【结果】1)28℃下，NaOH溶液软化、徒手切片法中，选择1、2 mol·L~(-1) NaOH溶液对雌蕊软化，徒手切片容易获得雌蕊的完整组织；浓度为4、6 mol·L~(-1)时，雌蕊细胞反应剧烈，迅速失水后缓慢复水，切片时花柄易脱离，子房和柱头易破裂。2)100℃高温高压整体软化透明法中，NaOH溶液和Na_2SO_3溶液对澳洲坚果雌蕊均具有很好的软化效果，虽然镜检时花粉管被花柱其他组织遮挡，但此方法为整体观察澳洲坚果花粉管提出了新方向。3）未调节pH值和pH值7.0的染色液对澳洲坚果雌蕊进行染色，均未能明显区分花粉管和花柱其他组织；染色液pH值10.0时，花柱其他组织仅发微弱荧光，花粉管发黄绿色荧光，花粉管清晰明了，根根分明。【结论】28℃下，2 mol·L~(-1) NaOH溶液软化待检材料3 h，徒手切片，然后使用强碱性染液染色，能够很好地激发花粉管的黄绿色荧光信号，是澳洲坚果花粉管荧光显微观察的最佳制片方法，此方法能快速、清晰地观察澳洲坚果花粉管在花柱内的生长行为。