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牛溶血性曼氏杆菌可视化LAMP检测方法的建立

2023-03-02分类号:S858.23

【作者】刘宁宁  易萍  郭爱珍  胡长敏  陈颖钰  
【部门】华中农业大学动物医学院/农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室  湖北省兽医流行病学国际科技合作基地  湖北洪山实验室  
【摘要】为建立一种能够快速、高效检测牛溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)的可视化LAMP检测法,利用LAMP引物设计软件,以溶血性曼氏杆菌保守基因lktC序列设计内引物、外引物及环引物,对其反应温度、Mg~(2+)浓度、dNTPs浓度等条件进行优化,并检测了方法的敏感性、特异性及实用性。结果显示,该方法在68.2℃、6 mmol/L Mg~(2+)、1.6 mmol/L dNTPs条件下达到最佳,40 min内完成检测并可通过肉眼判定结果,对细菌的最低检测限为6.7×10~(-1) cfu/μL,对lktC重组质粒的最低检测限为7.9×10~2 copies/μL,敏感性高;与15种病原均不发生交叉反应,特异性好;对背景清晰小鼠肺组织样本检测结果显示该方法实用性良好,且优于普通PCR方法。表明该方法可快速、高效检测牛溶血性曼氏杆菌。
【关键词】环介导等温扩增(LAMP)  lktC基因  溶血性曼氏杆菌  可视化检测  综合防控
【基金】湖北省重点研发计划项目(2020BBA055);; 宁夏回族自治区重点研发计划项目(2021BEF02028);; 国家现代农业(肉牛/牦牛)产业技术体系专项(CARS-37)
【所属期刊栏目】华中农业大学学报
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