【摘要】为探究巨菌草饲料的最佳发酵工艺和优势菌群，采用单因素试验考察了接种量、发酵温度、含水量和发酵时间等，并利用响应面法优化了主要因素，以检测指标中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、粗蛋白、氨态氮/总氮、乳酸/乙酸和丁酸的总评归一值(OD)为唯一响应值，确定最佳发酵工艺，再对饲料菌群进行富集，利用高通量测序技术分析饲料中细菌及真菌的组成和功能.结果表明：饲料最佳发酵工艺为发酵温度28℃、含水量60%、接种量2.6%和发酵时间9 d;传至第4代时，营养品质高且质量较稳定，其中性洗涤纤维含量62.24%、酸性洗涤纤维含量37.02%、相对饲用价值89.76%、粗蛋白含量10.41%、氨态氮/总氮为2.54%、pH 4.28、乳酸含量9.55%、乳酸/乙酸为0.85、丁酸含量5.40%;经连续富集后饲料中菌群的多样性增强，其菌群结构与原始菌种和发酵基料相关；传代前后的优势菌门(变形菌门、厚壁菌门和子囊菌门)并无显著差异，而优势细菌属由片球菌属和肠球菌属改变为泛菌属和乳酸杆菌属，优势真菌属由木霉属改变为Blumeria,并增加了Naganishia、Khuskia和Meyerozyma的丰度.综上，基于最佳工艺，菌群传至第4代的巨菌饲料营养品质、菌群结构和丰度较稳定且最佳，表明第4代菌群可作为巨菌草饲料的专用发酵菌群.