抑制猪支持细胞外泌体对精原干细胞自我更新及分化的影响
2023-03-15分类号:S828
【部门】南京农业大学干细胞研究与转化中心 南京农业大学动物科技学院生殖干细胞与微环境实验室
【摘要】[目的]本文旨在探讨猪支持细胞是否分泌外泌体,并利用体外模型检测支持细胞外泌体对猪精原干细胞(porcine Spermatogonial stem cells, pSSCs)命运的影响。[方法]通过两步酶消化法分离猪支持细胞和pSSCs并建立猪支持细胞-pSSCs体外共培养模型,抑制猪支持细胞外泌体的分泌,检测pSSCs自我更新及分化指标,明确支持细胞外泌体对pSSCs命运的影响。[结果]分离得到的支持细胞WT1阳性率为87.1%±0.02,ITGB1阳性率为94.2%±0.01,分离得到的pSSCs PLZF阳性率为80.6%±0.02;通过蛋白印迹分析、免疫荧光(Immunofluorescence, IF)证实支持细胞外泌体的存在;证实了20μM GW4869可以抑制外泌体分离且不损害支持细胞;处理后的支持细胞与pSSCs共培养发现,实验组较对照组pSSCs状态差异较为明显,且RT-PCR结果显示猪精原干细胞PLZF表达量显著升高;KIT、THY1、DDX4表达量显著降低;Western Blot结果显示猪精原干细胞PGP9.5表达量升高,DDX4表达量降低。[结论]结果表明体外培养时支持细胞分泌的外泌体对pSSCs自我更新和分化都具有调控作用,暗示外泌体是支持细胞调控精原干细胞命运的一种重要方式,这为种公猪生殖力的改善提供了新思路。
【关键词】猪 支持细胞 精原干细胞 外泌体
【基金】2021江苏省特聘教授项目;; 江苏省种业振兴项目(JBGS[2021]024)
【所属期刊栏目】南京农业大学学报
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