【摘要】建立共表达人μ阿片受体（human μ‐opioid receptor，hMOR，OPRM）与Gq蛋白的CHO-FlpIn稳定细胞模型，并鉴定其药理学功能，可为体外高通量筛选靶向OPRM的药物奠定基础。该研究首先构建重组表达质粒OPRM-pcDNA5/FRT，并进行鉴定；然后通过脂质体转染法将OPRM-pcDNA5/FRT、GqG66Di5-pIRES/puro3和FLP重组酶质粒POG44共转染CHO-FlpIn细胞，经抗性加压和有限稀释法挑取耐药单克隆，采用FLIPR钙信号检测方法筛选阳性克隆株；最后，通过RT-qPCR对细胞中的OPRM和GqG66Di5 mRNA表达水平进行检测，并选用OPRM激动剂DAMGO和抑制剂Naloxone对稳定细胞株的药理学功能进行鉴定。结果显示：经酶切确定了重组质粒的正确构建；通过重组质粒转染、抗生素加压筛选以及钙信号测定获得22个具有活性的克隆细胞株，其中15号细胞株的荧光信号值最高，命名为Gq-OPRM-CHO；与对照组相比，Gq-OPRM-CHO细胞组中OPRM与GqG66Di5基因mRNA水平分别升高约400倍和120倍；在Gq-OPRM1-CHO细胞中，FLIPR钙信号检测激动剂DAMGO的EC_(50)为0.02 ± 0.002μmol/L，抑制剂Naloxone的IC_(50)为0.04 ± 0.003 μmol/L。该研究成功建立了OPRM与GqG66Di5蛋白稳定共表达的细胞模型Gq-OPRM1-CHO，该细胞株具有对OPRM激动剂和拮抗剂特异性反应的药理学功能。