嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA2991的原核表达、纯化与免疫原性研究
2023-03-25分类号:S948
【部门】阜阳师范大学生物与食品工程学院 陕西理工大学生物科学与工程学院/中德天然产物研究所
【摘要】【目的】旨在评价嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA2991的免疫学功能,为探索嗜水气单胞菌渔用疫苗候选抗原提供理论依据。【方法】通过生物信息学分析AHA2991氨基酸序列,揭示不同菌株间的亲缘关系;分子克隆构建AHA2991表达菌株并确定最佳诱导条件;包涵体洗涤及SDS-PAGE切胶纯化获得AHA2991并免疫红鲫;Western blotting检测AHA2991红鲫血清的特异性与效价;ELISA模拟AHA2991红鲫血浆与嗜水气单胞菌的体外相互识别作用;酸性、碱性磷酸酶(ACP、AKP)测定与细胞吞噬作用评价AHA2991非特异性免疫功能;组织病理学切片探究AHA2991免疫对红鲫内脏的影响情况。【结果】AHA2991蛋白家族在不同菌株间具有同源性,不同菌株间亲缘关系较近,尤其在气单胞菌间亲缘关系更近;AHA2991的最佳诱导条件为:菌液浓度OD_(600) =1.0,IPTG终浓度0.1 mmol/L,在28 ℃下诱导8 h。红鲫AHA2991抗血清具有良好的特异性,其效价为1:800;体外AHA2991血浆对嗜水气单胞菌具有识别作用,滴度可达1:3 200;ACP、AKP指标及细胞吞噬作用均显示AHA2991激活红鲫非特异性免疫;组织病理学切片表明AHA2991免疫对红鲫内脏结构无影响。【结论】嗜水气单胞菌AHA2991具有良好的免疫原性,有望成为嗜水气单胞菌渔用疫苗的候选抗原成分。
【关键词】嗜水气单胞菌 外膜蛋白AHA2991 红鲫血浆 组织病理学 主动免疫
【基金】国家外国专家局项目(GDT20186100426);; 安徽省教育厅科学研究重点项目(2022AH051330);; 陕西省科技厅面上项目(2022JM-120);; 阜阳师范大学人才项目(2022KYQD0003)
【所属期刊栏目】西南农业学报
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