【摘要】为了建立蛙脑微血管内皮细胞原代培养方法，实验以黑斑侧褶蛙脑组织为实验材料，在无菌条件下分离出大脑灰质，利用0.1% Ⅱ型胶原酶和胶原酶-分散酶进行消化，经过Percoll密度梯度离心后，将获取的脑微血管段接种于鼠尾胶包被的培养瓶中，于28℃、5% CO_(2)条件下原代培养蛙脑微血管内皮细胞，并通过细胞形态学观察和Ⅷ因子相关抗原免疫荧光对细胞进行鉴定，最后用四唑蓝比色法（MTT）测定细胞的生长状态。结果显示，微血管段在体外培养1 d后开始贴壁生长，并逐渐扩大成团簇状，培养至7 d时，细胞呈“铺石路样”镶嵌式排列，表现为区域性单层生长；Ⅷ因子免疫荧光检测发现胞质呈红色，表达为阳性，阳性细胞率达97%以上；MTT实验显示细胞在第3～5 d时，生长速度最快。本研究首次建立了蛙脑微血管内皮细胞的原代培养与鉴定方法，为体外研究蛙类神经性疾病的发病机理奠定基础，也为相关药物的研发和筛选提供了细胞模型。