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奶牛乳房炎相关IRF5基因CDS区克隆及表达分析

2023-03-31分类号:S858.23

【作者】闫涛涛  姚婷婷  王正兴  马楠  蓝贤勇  周力  王兴平  罗仍卓么  
【部门】宁夏大学农学院  宁夏回族自治区反刍动物分子细胞育种重点实验室  西北农林科技大学动物科技学院  
【摘要】【目的】研究奶牛干扰素调节因子5(Interferonregulatoryfactor5,IRF5)基因在奶牛乳腺组织及乳腺上皮细胞炎症中的表达模式。【方法】利用RT-PCR和测序技术克隆得到IRF5基因的编码区(Codingsequence,CDS)序列,并采用生物信息学方法分析IRF5基因及其特性;利用qPCR技术检测IRF5基因及相关干扰素调节因子3(Interferonregulatoryfactor3,IRF3)和MyD88基因的表达量。【结果】IRF5基因的CDS长度为1500 bp,编码499个氨基酸,存在47个潜在磷酸化位点,氨基酸组成中脯氨酸(Pro)和亮氨酸(Leu)所占的比例较高。IRF5蛋白分子式为C_(2524)H_(3901)N_(671)O_(728)S_(20),主要存在于细胞核和线粒体,理论等电点为5.38,是碱性亲水且不稳定的非分泌蛋白。蛋白互作分析结果显示,IRF5蛋白可能与骨髓分化初级反应蛋白(MyD88)、白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK1)、C-C基序趋化因子4(CCL4)、组蛋白乙酰转移酶p300(EP300)和核受体共激活因子3异构体X1(NCOA3)等蛋白相互作用,与机体或细胞的炎症反应有关。qPCR结果表明,与健康奶牛相比,IRF5基因在乳房炎奶牛的乳腺组织中的表达量极显著上调(P < 0.01)。在乳腺上皮细胞中,与对照组(0 h)相比,IRF5及其相关的Myd88和IRF3基因在LPS诱导乳腺上皮细胞炎症反应的3、6和12 h的表达量均极显著上调(P < 0.01)。【结论】IRF5基因在奶牛乳房炎过程中表达量上调,可能通过上述基因参与促进奶牛乳房炎症反应。
【关键词】奶牛  乳房炎  IRF5基因  生物信息学分析  基因表达  乳腺上皮细胞
【基金】宁夏自然科学基金项目(2022AAC03056);; 宁夏高等学校科学研究项目(NGY2020007)
【所属期刊栏目】西南农业学报
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