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蓖麻类钙调蛋白基因RcCML42克隆与表达载体构建

2023-02-28分类号:S565.6

【作者】孙德慧  王晓宇  王莹  霍红雁  刘海臣  徐惠  张继星  
【部门】内蒙古民族大学生命科学与食品学院  
【摘要】为了探究类钙调蛋白基因家族成员在蓖麻体内的作用及表达模式,在蓖麻体内挖掘家族基因CML42,并对其进行克隆与表达分析。以哲蓖三号植株为试验材料,克隆获得RcCML42完整编码区序列(CDS),利用生物信息学方法对RcCML42基因序列进行分析,包括编码氨基酸、蛋白分子量及等电点、跨膜结构域、氨基酸序列一致性等内容。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)技术,检测RcCML42基因在蓖麻植株根、茎、叶位置不同时间点的特异性表达情况。结果显示,RcCML42 CDS长度为597 bp,编码198个氨基酸,含有3个EF-hand钙结合结构域。蛋白分子量为22.27 ku,等电点为4.55,不存在跨膜结构域。氨基酸序列一致性分析表明,RcCML42与巴西橡胶树一致性最高,达86.84%。qRT-PCR结果显示,RcCML42基因在蓖麻根、茎、叶组织中均有表达,在经NaCl处理后,RcCML42在根中的表达量呈现先下降后上升的趋势。RcCML42在茎中12 h高度表达,在叶中为8 h高度表达。且在茎中的表达量显著高于其在根、叶中的表达。CML是植物体内最重要的一类钙感受器,通过与钙调素结合蛋白结合进而对植物细胞进行调控。当植物受到环境中NaCl侵害时,CML可以参加体内钙离子的调节,进而减轻盐胁迫对植物体的损害。综上,推测RcCML42在盐胁迫条件下的蓖麻信号转导中起重要作用。
【关键词】蓖麻  类钙调蛋白  耐盐  钙离子  生物信息学
【基金】国家自然科学基金项目(31760399;32060493);; 内蒙古自治区研究生科研创新资助项目(SZ2020139);; 内蒙古自治区2020年度人才开发基金个人项目(nmgrcjj20200616);; 内蒙古民族大学研究生科研创新资助项目(NMDSS2147;NMDSS2152)
【所属期刊栏目】华北农学报
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