褪黑素和烟酰胺单核苷酸对鹅骨骼肌卫星细胞增殖的影响
2023-01-16分类号:S835
【部门】浙江农林大学动物科技学院/动物医学院 宁波市象山县农业农村局 丽水学院生态学院
【摘要】【背景】目前关于褪黑素(melatonin,MLT)的研究多集中在家禽的生殖功能上,而与家禽肌肉发育相关的作用机制却鲜有研究。同时MLT与烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide, NMN)功能相似且都与昼夜节律相关,研究发现MLT与NMN的单一处理对细胞衰老的影响有限,而共同处理的效果更为显著,虽然二者对线粒体功能和骨骼肌衰老的影响也有相关报道,但在骨骼肌生长发育的作用机制方面尚无可以参考的报道。【目的】通过探究MLT与NMN参与浙东白鹅骨骼肌卫星细胞增殖的分子机制,为其在家禽生产实践中的应用提供思路。【方法】通过解剖鹅胚分离培养鹅骨骼肌卫星细胞,并对骨骼肌卫星细胞的特异性蛋白Pax7和Desmin进行免疫荧光染色以此鉴定细胞,在体外成熟培养基础上用1 ng·mL-1 MLT与1μg·mL-1 NMN分别单独或组合处理细胞24 h后,利用CCK-8检测细胞活力;为探究MLT如何调控鹅骨骼肌卫星细胞增殖的机制,通过构建MLT受体基因(MTNR1A、MTNR1B)的过表达载体,并与1 ng·mL-1 MLT共同处理细胞,采用qRT-PCR和Western blot实验技术研究过表达MTNR1A、MTNR1B是否影响MLT对增殖基因的促进作用;为了进一步探究MLT与NMN对鹅骨骼肌卫星细胞增殖相关基因的影响,采用qRT-PCR和Western blot实验技术检测骨骼肌细胞增殖相关基因的表达变化。【结果】骨骼肌卫星细胞的特异性标志蛋白Pax7和Desmin分别在细胞核和细胞质中呈绿色荧光的阳性反应,结果表明试验所用细胞为骨骼肌卫星细胞,CCK-8检测结果表示1 ng·mL-1 MLT与1μg·mL-1 NMN促进鹅骨骼肌卫星细胞活性,qRT-PCR和Western blot结果显示,与对照组相比,过表达MLT受体基因MTNR1A、MTNR1B后,增殖标志基因Pax7的mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.05),抑制增殖的标志基因MSTN的mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.05),抑制增殖的标志基因MSTN的mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.05),其变化比NMN和MLT单独处理更为显著。【结论】MLT通过其受体促进骨骼肌卫星细胞增殖,NMN和MLT共同处理可以加强MLT对鹅骨骼肌卫星细胞增殖的促进作用,也为MLT和NMN在家禽实际生产中的应用提供了新思路。
【关键词】浙东白鹅 褪黑素 烟酰胺单核苷酸 过表达载体 骨骼肌
【基金】国家自然科学基金(31872397);; 浙江农林大学学生科研训练项目(S202210341158)
【所属期刊栏目】中国农业科学
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