【摘要】[目的]本实验旨在探究日本脑炎病毒（Japanese Encephalitis Virus， JEV）NS1蛋白的生物学功能。[方法]将JEV NS1基因克隆到pFastbac1载体并将其转化至DH10Bac感受态得到重组杆粒，将重组杆粒转染sf9细胞产生重组杆状病毒，通过病毒感染High5细胞成功表达了JEV NS1。在人脑内皮细胞上清中添加外源NS1蛋白后，通过光学显微镜观察细胞形态，利用共聚焦检测显微镜观察JEV NS1蛋白对人脑内皮细胞表面的唾液酸修饰的影响，IFA检测细胞中组织蛋白酶L的表达；小鼠尾静脉注射JEV NS1及其N207糖基化位点突变体蛋白NS1 N207Q，在不同的时间段通过伊文思蓝染色（EB）来评估小鼠的血脑屏障（BBB）通透性。[结果]JEV NS1蛋白能通过下调人脑内皮细胞表面的唾液酸修饰和上调组织蛋白酶L表达导致内皮糖萼损伤；动物实验表明NS1蛋白能够破坏小鼠的血脑屏障；NS1 N207Q蛋白处理细胞对其表面唾液酸修饰的影响不显著，体内处理对小鼠的血脑屏障无明显损伤。[结论]JEV NS1蛋白具有损伤脑内皮的生物学功能，突变N207位点后导致其损伤功能大幅度减弱，可为JEV亚单位疫苗候选抗原的优化提供新思路。