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三角帆蚌IGF2基因的亚细胞定位及重组蛋白促体外细胞活性分析

2022-08-11分类号:S917.4

【作者】李雪男  冯上乐  王贺  申晓雅  陈一格  白志毅  李文娟  
【部门】上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心  上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室  
【摘要】胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factors 2, IGF2)在多种细胞生长、分化和合成代谢的调节中发挥重要的调控作用。本研究成功构建了淡水珍珠贝三角帆蚌IGF2的重组质粒pEGFP-IGF2和pET32a-IGF2,通过pEGFP-IGF2-细胞转染,表明该蛋白定位在细胞质与细胞核中。将pET32a-IGF2转化到BL21 (DE3)中进行蛋白诱导表达,成功得到其原核表达载体,SDS-PAGE检测显示,在约25kD处有一条清晰的条带,符合目的条带大小(26.27kD),且主要表达于上清液中。为研究重组蛋白IGF2对三角帆蚌细胞活性的作用,本研究通过CCK8细胞活性测定,进一步探讨了添加不同浓度重组目的蛋白(0 μg/mL、2.5 μg/mL、5 μg/mL、7.5 μg/mL、 12.5 μg/mL、17.5 μg/mL、 22.5 μg/mL)培养的三角帆蚌外套膜细胞增殖活性。结果显示,三角帆蚌IGF2重组蛋白能显著促进三角帆蚌外套膜细胞的增殖活力(P<0.05),且在其浓度为12.5 μg/mL时对三角帆蚌外套膜细胞的促生长效果最佳,这为促进三角帆蚌外套膜细胞传代、细胞系建立奠定了基础,也为下一步探究IGF2在贝类中的功能提供依据。
【关键词】三角帆蚌  IGF2  亚细胞定位  重组蛋白  细胞培养  生物活性
【基金】国家重点研发计划(2018YFD0901406);; 国家自然科学基金(31872565);; 上海市学术研究带头人计划(19XD1421500)
【所属期刊栏目】上海海洋大学学报
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