猪CYP11A1基因编码区扩增及核心启动子区的鉴定与分析
2022-05-05分类号:S828.2
【部门】南京农业大学动物科技学院
【摘要】[目的]本文旨在扩增猪CYP11A1基因编码区,鉴定并分析其核心启动子区,探究猪CYP11A1基因的转录调控机制。[方法]通过基因克隆测序技术获得猪CYP11A1基因编码区全序列,并对其序列特征进行分析;利用荧光素酶活性试验鉴定猪CYP11A1基因核心启动子区,并通过生物信息学分析猪CYP11A1基因核心启动子区上潜在的甲基化位点与转录因子结合位点;同时,利用Western blot、qRT-PCR以及染色质免疫沉淀(ChIP)等分子生物学手段解析转录因子NR2C1对猪CYP11A1基因的转录调控功能。[结果]猪CYP11A1基因的编码区序列全长为1 563 bp,在哺乳动物的进化过程中高度保守;猪CYP11A1基因的核心启动子区为-398 bp~-108 bp(转录起始位点为+1),序列特征分析发现猪CYP11A1基因核心启动子区上包含多个潜在的转录因子的结合元件,包括NR2C1、SOX10、NFIX和ELF5等;另外,转录因子NR2C1可促进猪CYP11A1基因核心启动子区活性,同时显著上调体外培养的猪卵巢颗粒细胞中CYP11A1基因的表达。[结论]哺乳动物CYP11A1基因在进化过程中高度保守,NR2C1作为转录因子能够促进猪卵巢颗粒细胞中CYP11A1基因的转录。
【关键词】猪 CYP11A1基因 核心启动子鉴定与分析 NR2C1 转录调控
【基金】江苏省自然科学基金(BK20180524);; 中国博士后科学基金(2018M632321)
【所属期刊栏目】南京农业大学学报
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