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基于八角转录组序列的SSR分子标记引物开发

2022-05-23分类号:S573.9

【作者】余兴华  杨艳梅  李玉祥  陶永宏  孟凡来  滕娟  
【部门】文山州农业科学院  云南农业大学  
【摘要】【目的】为解决八角(Illicium verum)缺乏的SSR分子标记,以八角转录组数据为基础,开发EST-SSR分子标记,揭示其在转录组序列中的分布类型及特征,为八角分子生物学研究奠定基础。【方法】应用SSR搜索程序从八角转录组数据中筛选SSR位点,并对SSR重复基序种类、数量、分布特征等进行统计分析。应用在线设计软件对SSR引物进行设计,采用毛细管电泳的方法检测并确定引物多态性,应用筛选到的多态性引物分析不同八角种质间的遗传关系。【结果】从44267条Unigenes中获得8210个SSR位点,含一个EST-SSR 位点的占比为11.11%,含2个或2个以上EST-SSR 位点的占比为3.13%,复合SSR位点的占比为2.09%。SSR 发生频率为14.24%,平均每5.37 kb出现一个SSR。在检索出的SSR位点中,二核、三核苷酸是主要重复类型,二核苷酸重复中以AG/CT占比最高,为46.03%,三核苷酸重复中以GAA/CTT占比最高,为16.58%,四、五、六核苷酸的重复类型及占比相对较少。SSR重复单元的重复次数为4~40次,其中5次重复数最多,占比22.58%,再者为6次重复,占比19.83%;微卫星的长度分布为12~80 bp,其中12~15 bp的最多,占比37.39%。随机挑选的100对引物中扩增筛选出16对多态性较高的引物,其Na为3~8、Ho为0.13~0.88、He为0.54~0.88、Ne为2.03~5.82、I为0.83~1.84、引物多态性信息量指数为0.43~0.81,平均值为0.63,表明所开发的EST-SSR位点具有较高的多态性,遗传关系指出不同八角种质间具有不同的亲缘关系。【结论】基于八角转录组序列开发EST-SSR标记是可行的,其引物具有特异性好、多态性高等优点,开发的SSR标记能为八角遗传多样性分析、功能基因挖掘、遗传连锁图谱构建等提供依据。
【关键词】八角  转录组测序  EST-SSR  引物开发
【基金】国家自然科学基金项目(31760417);; 文山州基础科学研究项目(2019WF03);; 文山州创新人才项目(202136);; 文山州政府八角高质量发展项目(202126)
【所属期刊栏目】西南农业学报
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