酵母双杂交技术筛选与绵羊微管解聚蛋白相互作用的蛋白
2022-04-28分类号:S826
【部门】郑州师范学院生命科学学院 河北农业大学动物科技学院 吉林医药学院检验学院
【摘要】采用TRIzol法提取绵羊卵巢组织总RNA,运用RT–PCR技术扩增绵羊微管解聚蛋白基因(STMN1)的编码区序列;通过同源重组技术构建重组诱饵表达载体p GBKT7–STMN1,鉴定该诱饵蛋白在酵母双杂交系统中的自激活活性、细胞毒性和表达情况;利用诱饵质粒p GBKT7–STMN1从绵羊卵巢组织细胞的酵母双杂交cDNA文库筛选互作的宿主蛋白。结果显示:成功构建重组诱饵质粒p GBKT7–STMN1,并对酵母细胞无自激活活性和细胞毒性作用,且能在酵母细胞中正常表达;筛选获得12个与STMN1相互作用的克隆,经测序比对分析和点对点验证,得到CREB和FOXM1共2个互作的宿主蛋白,这2个蛋白可能参与调控细胞的增殖、周期、凋亡等过程。
【关键词】绵羊 微管解聚蛋白(STMN1) 诱饵载体 c DNA文库 酵母双杂交 互作蛋白
【基金】国家自然科学基金项目(32071447);; 河南省高等学校重点科研项目(21A180027);; 河南省自然科学基金项目(202300410509);; 河南省科技攻关项目(222102110421);; 郑州师范学院大学生科研创新基金项目(2021013)
【所属期刊栏目】湖南农业大学学报(自然科学版)
文献传递