【摘要】蛋白酶抑制因子是极其多样的蛋白质或多肽，能抑制蛋白酶的水解活性。研究发现蛋白酶抑制因子能通过抑制病原蛋白酶活性，从而抑制病原的入侵。I84蛋白酶抑制因子家族是MEROPS数据库中新增的一个家族，其部分成员在免疫防御过程中的作用得到了一定的揭示。为探究I84蛋白酶抑制因子家族在长牡蛎中的分布和功能状况，本研究鉴定了长牡蛎中23个潜在的I84家族基因，根据系统进化树分析，挑选了5个同源基因进行时空表达和功能分析。首先，利用克隆技术验证了长牡蛎中5个I84家族同源基因CgSi3、CgSi5、CgSi6、CgSi16和CgSi19可表达性。结果显示，5个基因在外套膜、闭壳肌、性腺、血淋巴细胞、肝胰腺和鳃等6个组织中均表达，但肝胰腺中表达量显著高于其他组织。同时，5个基因在长牡蛎幼体不同发育阶段表达模式不同，其中各基因在受精卵时期均不表达，CgSi3表达量则在眼点幼虫显著上升后下降，而CgSi6在壳顶幼虫期开始表达后，表达量随长牡蛎发育而持续增加。另外，对牡蛎进行病原相关模式分子（PAMPs）注射后5个基因也表现不同的表达模式，其中LPS和PGN注射后CgSi6 表达量明显变化，而poly（I:C）和GLU注射后CgSi3表达量明显变化，并且CgSi3和CgSi6在不同刺激下表达模式也存在差异。研究表明，I84蛋白酶抑制因子家族在长牡蛎中发生了明显的家族扩张，而且扩张形成的同源基因在功能上产生分化。