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刺激隐核虫钙调蛋白基因的分子鉴定

2021-12-24分类号:S941.5

【作者】倪炜  张经纬  余玲莹  黄晓红  
【部门】福建师范大学生命科学学院福建省发育与神经生物学重点实验室  美国弗罗里达大学分子遗传学和微生物学系  
【摘要】为了解钙调蛋白在刺激隐核虫生长发育过程中的作用,实验从刺激隐核虫滋养体cDNA文库中克隆出钙调蛋白基因(cicam),优化密码子后人工合成开放阅读框,构建成重组质粒pGEX-4T-1/cicam,将其转化至大肠杆菌后,用ZYM-5052自诱导培养基诱导重组子表达。用谷胱甘肽琼脂糖凝胶及凝血酶纯化重组蛋白rCiCaM,并用其免疫小鼠BALB/c株获得多克隆抗体。分别用逆转录PCR和免疫印迹实验检测cicam及其编码蛋白CiCaM在各期虫体中的表达。用间接荧光抗体试验检测CiCaM在幼虫中的定位。覆盖印迹实验(Blot overlay assay)初步探讨了重组蛋白rCiCaM结合重组肌动蛋白解聚因子的活性。结果显示,cicam的开放阅读框为450 bp,编码含149个氨基酸的肽链,其分子量预测值为16.9 ku;原核表达的融合蛋白GST-rCiCaM及切除GST标签的rCiCaM的表观分子量分别为43 ku及16.9 ku,均与预测值相符;cicam在刺激隐核虫的各个发育阶段都有稳定的表达,其表达产物CiCaM的分子量与预测值相符;在幼虫细胞内CiCaM在胞质中均有分布,尤以在4个大核周围及胞口部位更为富集;CiCaM与CiADF_(2)之间可能发生Ca~(2+)依赖性的相互作用。该研究丰富了刺激隐核虫病原分子生物学知识,为刺激隐核虫病防治方法的开发提供参考。
【关键词】刺激隐核虫  钙调蛋白  克隆  表达  分子鉴定
【基金】国家自然科学基金(31672244);; “十三五”海洋经济创新发展示范项目(FZHJ11)
【所属期刊栏目】水产学报
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