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草鱼PepT2基因的克隆及其表达分析

2022-03-15分类号:S917.4

【作者】刘金梦  秦贝贝  黎航航  肖调义  苏建明  
【部门】湖南省特色水产资源利用工程技术研究中心  湖南农业大学动物科学技术学院  湖南农业大学动物医学院  
【摘要】采用RT–PCR和cDNA末端快速扩增技术克隆草鱼(Ctenopharyngodon idellus) II型小肽转运载体(PepT2)基因全长cDNA序列,对其进行生物信息学和共线性分析,并采用实时荧光定量PCR技术检测分析健康草鱼PepT2基因在不同组织中的表达情况。结果表明:草鱼PepT2基因的cDNA序列全长为2733 bp,包括开放阅读框2169 bp(编码722个氨基酸残基),5′非编码区82 bp和3′非编码区482 bp;草鱼PepT2基因结构含有20个外显子和19个内含子;预测蛋白相对分子质量为8.032×10~(4),等电点为6.01,该蛋白具有与哺乳动物同源蛋白类似的12个螺旋跨膜结构,并且在跨膜区9和10之间有1个大的外环,跨膜区氨基酸高度保守,含有6个蛋白激酶C磷酸化位点和3个N–糖基化位点;预测的PepT2蛋白三级结构包含有18个α–螺旋和21个β–折叠;氨基酸序列同源性分析结果显示,草鱼PepT2氨基酸序列与斑马鱼(Danio rerio)的同源性最高,为86.65%,与其他所比较的物种的同源性则为52.83%~68.15%;系统进化树分析表明,草鱼与斑马鱼的亲缘关系最近;与斑马鱼相比,草鱼PepT2所在的染色体保留着大多数基因,具有保守的基因块;实时荧光定量表达分析表明,草鱼PepT2在肠道中表达量最高,其次是肾脏。
【关键词】草鱼  小肽转运载体  PepT2  克隆  生物信息学分析  共线性分析  组织表达
【基金】国家大宗淡水鱼产业技术体系项目(CARS–45–48)
【所属期刊栏目】湖南农业大学学报(自然科学版)
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