【摘要】为了解湘西黄牛粪源大肠埃希菌的耐药情况，从湘西黄牛主产区花垣县和凤凰县6个不同规模的湘西黄牛养殖场采集黄牛肛门拭子样品，用麦康凯培养基和大肠埃希菌特异性引物分离、鉴定大肠埃希菌；采用K–B法对分离的大肠埃希菌进行5类共18种常用抗菌药物的敏感性试验；利用超高通量荧光定量PCR对16株多重耐药大肠埃希菌的7类共22种耐药基因进行检测；用大肠埃希菌8个管家基因对此16株分离株进行多位点序列分型(MLST)，并运用goe BURST程序和MEGA 7.0对其进行ST聚类分析和进化树分析。结果表明：从采集的206份黄牛肛门拭子样品中共分离、鉴定出大肠埃希菌170株；分离自各牛场的大肠埃希菌对四环素、多西环素、氨苄西林、复方新诺明和甲氧苄氨嘧啶的耐药性较高，耐药性最高的牛场对这5种抗菌药物的耐药率分别为29.63%、16.67%、22.22%、16.67%、33.33%，共有16株多重耐药菌，有8种耐药谱型；有acrA–01(100.00%)、fox5(81.25%)、sul1(68.75%)、sul2(75.00%)、folA(100.00%)、tetR–02(81.25%)、intI–1(clinic)(68.75%)和tnpA–01(50.00%)等6类8种耐药基因被检出；共获得11种ST型，其中，有9种新的ST型；16株分离株可分成2个克隆群和7个单独型；所有分离株聚集归为2个大群，分别为2个分支和7个分支。可见，湘西黄牛粪源大肠埃希菌的耐药性整体偏低，多重耐药菌主要出现于大型规模养殖场，且具有一定的复杂性，应加强对大型规模黄牛养殖场粪源大肠埃希菌耐药性的监控。