脊尾白虾UCHL5的基因克隆及其在卵巢发育中的功能研究
2021-07-19分类号:S917.4
【部门】江苏省海洋生物资源与生态环境重点实验室江苏省海洋生物技术重点实验室江苏海洋大学 江苏省海洋生物资源与生态环境重点实验室江苏省海洋生物技术重点实验室 江苏海洋大学 江苏省海洋生物产业技术协同创新中心 江苏省农业种质资源保护与利用平台
【摘要】为了解泛素羧基端水解酶5基因(ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase isozyme L5, UCHL5)在脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)卵巢发育中的作用,本研究采用RACE技术克隆了脊尾白虾UCHL5全长cDNA,并对其在脊尾白虾不同组织和不同卵巢发育时期的表达情况进行了分析,在此基础上构建了pET32a-UCHL5原核表达载体,进行了诱导表达研究。结果显示,UCHL5 cDNA全长为1 440 bp,共编码329个氨基酸,预测其相对分子量为37.57 kDa,理论等电点为5.51。系统进化分析表明,脊尾白虾UCHL5氨基酸序列与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)同源性最高(83%),与同为甲壳纲的凡纳滨对虾、拟穴青蟹(Scylla paramamosain)和三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)聚为一支。荧光定量PCR分析结果显示,UCHL5在鳃中的表达量最高,其次是卵巢,且以上2种组织中的表达量均显著高于其他组织;在卵巢不同发育时期,UCHL5的表达呈先上升后下降的趋势,在Ⅴ期急剧下降到最低水平。构建的UCHL5原核表达载体,在大肠杆菌(Escherichia coli)中成功表达UCHL5融合蛋白。本研究结果显示,UCHL5可能与脊尾白虾卵巢发育有密切的关系,为研究甲壳动物卵巢发育的分子调控机制提供了理论基础。
【关键词】脊尾白虾 UCHL5 卵巢 实时荧光定量PCR 原核表达
【基金】江苏省研究生科研与实践创新计划项目(KYCX19-2288);江苏省研究生科研与实践创新计划项目(KYCX18-2572);; 江苏省优势学科建设工程资助项目(PAPD);; 江苏省海洋生物资源与环境重点实验室开放课题基金(SH20191203)共同资助
【所属期刊栏目】渔业科学进展
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