Akt参与中华绒螯蟹免疫的功能
2021-11-29分类号:S917.4
【部门】大连民族大学生命科学学院生物技术与资源利用教育部重点实验室 大连海洋大学水产与生命学院
【摘要】Akt作为PI3K-AKT 信号通路的核心分子,在细胞增殖、代谢、发育和存活等过程中发挥重要作用。本研究采用特异性引物及PCR技术,克隆获得了中华绒螯蟹Akt基因(EsAkt)并进行生物信息学分析,实时定量PCR技术检测了EsAkt在中华绒螯蟹不同组织和不同免疫刺激后的表达水平,免疫荧光技术检测了EsAkt蛋白的细胞定位,双链RNA干扰技术分析了EsAkt干扰后凋亡基因的变化。结果显示,EsAkt分子包含PH结构域、中心催化结构域(S_TKc)和羧基端疏水结构域(S_TK_X)3个保守的结构域。EsAkt在所有被检测的组织中呈现组成型表达,且在免疫相关组织(如肝胰腺、鳃和血淋巴细胞)中的表达量显着高于胃和肠道(P < 0.01)。EsAkt蛋白主要以弥散状的形式分布在细胞质中。中华绒螯蟹注射脂多糖(LPS)和嗜水气单胞菌后,显著诱导EsAkt转绿本的表达,LPS免疫刺激12 h后,EsAkt响应达到峰值,为对照组的4.35倍(P < 0.01),刺激48 h后,EsAkt的mRNA表达水平有所降低,但仍是对照组2.62倍(P < 0.01);嗜水气单胞菌免疫刺激6 h后,EsAkt响应达到峰值,为对照组的9.05倍(P < 0.01),刺激48 h后,EsAkt的mRNA表达水平回落到正常水平。双链RNA干扰EsAkt后,EsAkt的mRNA表达水平为对照组的0.38倍(P < 0.05),而凋亡相关基因EsCaspase-3-like表达水平显著上调,为对照组的2.69倍(P < 0.05)。本研究丰富了中华绒螯蟹PI3K-AKT信号通路研究的基本资料,为进一步研究甲壳动物免疫防御机制奠定了基础。
【关键词】中华绒螯蟹 蛋白激酶B 基因表达 免疫 凋亡
【基金】国家自然科学基金(31372347);; 大连民族大学服务国家战略专项(0970-110007);; 大连民族大学人才引进科研启动基金(110181)
【所属期刊栏目】水产学报
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