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日本落叶松LaSPL2和LaSPL3在体细胞胚发育中的表达分析

2021-10-13分类号:S791.223

【作者】范艳如  兰倩  韩素英  齐力旺  张立峰  
【部门】中国林业科学研究院林业研究所林木遗传育种国家重点实验室国家林业和草原局林木育种与培育重点实验室  中国林业科学研究院林业科技信息研究所  中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所  
【摘要】[目的 ]通过研究LaSPL2和LaSPL3的分子特征和表达模式,揭示其在落叶松体细胞胚发育中的功能。[方法 ]利用同源克隆及RACE技术,获得LaSPL2和LaSPL3的全长cDNA序列,通过生物信息学分析其编码蛋白保守结构域、进化关系等,利用烟草瞬时表达体系进行亚细胞定位研究,采用qRT-PCR检测2个基因在落叶松体细胞胚发育过程的表达模式。[结果 ]本研究获得了2个落叶松SPL同源基因LaSPL2和LaSPL3,分别编码532个氨基酸和191个氨基酸,其c DNA序列均存在miR156识别位点。多序列比对分析发现:它们均具有保守的SBP结构域。亚细胞定位结果显示:LaSPL2和LaSPL3定位于细胞核中。qRT-PCR结果表明:在落叶松体细胞胚发育早期,ABA下调LaSPL2和LaSPL3表达;随着体细胞胚的进一步发育,LaSPL2和LaSPL3的表达水平分别在10 d和14 d达到峰值;之后随着体细胞胚发育成熟,它们的转录水平逐渐下降,并在42 d达到最低值。[结论 ]通过分析ABA缺失对LaSPL2和LaSPL3表达的影响,表明ABA可能是落叶松体细胞胚发育早期LaSPL2和LaSPL3下调表达的主要因子;LaSPL2和LaSPL3的表达量在体细胞胚发育的早期阶段均达到最高峰,表明它们可能是早期胚胎形成的一个重要调控因子;LaSPL2和LaSPL3序列分析及表达模式,表明它们在体细胞胚发育中可能受miR156调控,并在体细胞胚的成熟过程中具有重要意义。
【关键词】日本落叶松  SPL  体细胞胚  基因克隆  表达分析
【基金】国家自然基金项目(31330017、31600544);; 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(CAFYBB2019SY011);; 国家科技重大专项课题(2018ZX08020-003)
【所属期刊栏目】林业科学研究
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