沙门菌噬菌体T139基因组分析及其裂解酶LysT40的异源表达和活性鉴定
2021-10-14分类号:TS201.3
【部门】华中农业大学食品科学技术学院
【摘要】为开发噬菌体裂解酶作为一种新型的抗菌剂,用于沙门菌的防控,采用生物信息学及异源表达蛋白的方法,获得鼠伤寒沙门菌噬菌体T139的裂解酶,并验证裂解酶对鼠伤寒沙门菌的裂解活性。通过对鼠伤寒沙门菌噬菌体T139基因组进行分析,发现该基因组全长38 854 bp,平均GC含量为49.10%,不包含tRNA基因。进化树分析表明噬菌体T139属于T7噬菌体属,共预测出43个ORFs,有23个被赋予已知功能。多序列比对及保守结构域分析表明,orf 40基因编码的蛋白(LysT40)包含126个氨基酸残基,具有内肽酶保守结构域,为可能的噬菌体裂解酶。LysT40二级结构中存在大量的螺旋结构(70.63%),使得该蛋白能够保持结构稳定。将orf 40进行异源表达、纯化,经过SDS-PAGE和Western blot分析,在10~15 ku处获得单一目标蛋白条带,纯化的蛋白质量浓度为280μg/mL。LysT40在30 min内对氯仿或EDTA预处理的鼠伤寒沙门菌具有较好的裂解活性,吸光值OD_(600)相比于对照组分别下降0.18和0.31。
【关键词】鼠伤寒沙门菌 基因组分析 噬菌体裂解酶 表达纯化 裂解活性 食源性致病菌 抗菌药物替代品
【基金】“十三五”国家重点研发计划重点专项(2017YFC1600100);; 国家自然科学基金面上项目(31772054)
【所属期刊栏目】华中农业大学学报
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