茉莉酸信号转录抑制关键组分JAZ与NINJA互作体系建立及复合体结晶条件筛选
2021-11-22分类号:Q943.2
【部门】南京农业大学植物保护学院
【摘要】[目的]本文旨在建立JAZ与NINJA蛋白离体和活体互作以及2个蛋白复合体晶体筛选的体系,并获得2个蛋白复合体晶体。[方法]采用酵母双杂交和双分子荧光互补法用于活体条件下JAZ与NINJA蛋白互作区域的验证;在离体条件下,通过氢氘交换质谱(HDX) 和Alpha Screen验证JAZ与NINJA蛋白的互作区域并进一步筛选两个蛋白互作的最小区域;使用原核(大肠杆菌)表达系统,亲和层析和凝胶过滤层析纯化等手段获得NINJA截短蛋白。将NINJA截短蛋白与JAZ多肽按照物质的量比1:1.5混合并孵育一段时间,通过坐滴结晶方法进行复合体结晶,并最终获得复合体晶体。[结果]成功创建了JAZ与NINJA离体和活体互作体系;分别在0.2 mol·L~(-1) 二水氯化钙、0.1 mol·L~(-1) BIS-TRIS pH6.5、45%2-甲基-2,4-戊二醇;0.2 mol·L~(-1) 醋酸铵、0.1 mol·L~(-1) Tris pH8.5、45%2-甲基-2,4-戊二醇两个条件下获得JAZ多肽与NINJA(342-406)的复合体晶体。[结论]JAZ蛋白ZIM结构域的TIFY基序和羧基端与NINJA(342-406)是JAZ与NINJA蛋白互作所必需的;JAZ蛋白ZIM结构域是JAZ同源和异源互作所必需的;成功获得了JAZ与NINJA复合体晶体。
【关键词】茉莉酸 JAZ NINJA ZIM结构域 互作 晶体学
【基金】教育部霍英东青年教师基金项目(161022);; 江苏省六大人才高峰高层次人才项目(NY-035);; 中组部万人计划“青年拔尖”人才项目
【所属期刊栏目】南京农业大学学报
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