基于CRISPR/Cas9技术的水稻OsARF12突变体的构建
2021-06-28分类号：S511
【部门】河南粮食作物协同创新中心河南省水稻生物学重点实验室河南农业大学
【摘要】为研究水稻生长素响应因子OsARF12在水稻生长发育中的作用,通过CRISPR/Cas9基因编辑技术,设计OsARF12 2个不同外显子突变靶点,化学合成包括突变靶点的特异性序列,并与中间载体sgRNA连接进而与Cas9终载体重组获得OsARF12 2个不同突变靶点的表达载体。选取测序成功的单一克隆,利用农杆菌介导法导入粳稻品种日本晴,获得转基因植株,并结合测序结果分析突变单株的突变类型,T_1突变体KO-ARF12-1有3种纯合突变、2种双等位突变,共5种突变类型;KO-ARF12-2有6种纯合突变、4种双等位突变和1种杂合突变,共11种突变类型。挑选突变类型为缺失1 nt、缺失4 nt、缺失7 nt和缺失2 nt插入1 nt、缺失5 nt的株系作为研究对象,荧光定量PCR鉴定结果表明,OsARF12在突变体中的表达量较野生型极显著下降(P
【关键词】水稻 OsARF12 CRISPR/Cas9 基因编辑 株高
【基金】国家自然科学基金项目(31871554);; 河南省高校科技创新人才支持计划(21HASTIT037);; 河南省青年人才托举工程项目(2019HYTP024);; 河南省水稻产业技术体系项目(S2012-04-G02);; 河南农业大学高层次人才——拔尖人才支持计划项目
【所属期刊栏目】华北农学报
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