转基因大豆‘ZH 10-6’数字PCR精准定量检测方法的建立
2021-11-15分类号:S565.1
【部门】天津市农业科学院生物技术研究所 河北农业大学食品科技学院
【摘要】为实现转基因耐除草剂大豆品种‘ZH 10-6’转化体成分的精准定量检测,以转基因大豆‘ZH 10-6’的5′端边界序列为靶序列,设计PCR扩增引物和TaqMan探针,并对引物探针浓度进行优化,经特异性测试,建立了耐除草剂大豆品种‘ZH 10-6’的微滴式数字PCR检测方法。结果表明:1)特异性良好:只有以转基因耐除草剂大豆品种‘ZH 10-6’基因组为模板才有扩增信号;2)灵敏度高:在相对标准偏差≤25%的情况下,方法的检出限(LOD)为13.0个拷贝;定量限(LOQ)为66.0个拷贝;3)PCR扩增反应模板含量与样品拷贝数之间线性相关系数R2>0.99,DNA含量线性范围为0.08%~100.00%。综上,本研究建立的转基因耐除草剂大豆‘ZH 10-6’转化体定量方法特异性强、稳定性好、准确度和灵敏度高,可用于对转基因大豆品种‘ZH 10-6’的定量检测。
【关键词】微滴式数字PCR 转基因耐除草剂大豆‘ZH 10-6’ 精准定量 转化体特异性
【基金】转基因重大专项(2019ZX08013-002,2019ZX08004001)
【所属期刊栏目】中国农业大学学报
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