青鳉tsn的克隆与表达分析
2021-06-02分类号:S917.4
【部门】上海海洋大学农业农村部淡水水产种质资源重点实验室 上海海洋大学国家海洋生物科学国际联合研究中心 上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室
【摘要】有性繁殖的性别决定机制虽具有多样性,但其生殖细胞都经过几轮有丝分裂和增殖后进入减数分裂,最终产生雌性或雄性配子。尽管有丝分裂过程中的生殖细胞在形态上没有雌雄差异,然而,未分化的生殖细胞在有丝分裂过程中如何获得雌雄性别特征尚不清楚。青鳉(Oryziaslatipes)正常(gsdf~(+/+))XX卵巢、正常(gsdf~(+/+))XY精巢以及性腺体细胞衍生因子(gonadalsoma-derivedfactor,gsdf )缺失型(gsdf~(-/-))卵巢的蛋白质组学质谱比对分析结果显示,gsdf~(-/-)XY卵巢中Tsn(Translin)蛋白产物显著高于gsdf~(+/+)XX卵巢,提示了Tsn蛋白表达可能受 dmy (DM-domain on Y chromosome,又名dmrt1bY)及下游的雄性信号调控。从青鳉性腺组织的cDNA中克隆了tsn基因的ORF(Open Reading Frame)片段。氨基酸序列的同源性比对分析及系统发育树评估显示,Tsn在脊椎动物物种间具有进化保守性,青鳉和斑马鱼(Danio rerio)的Tsn氨基酸序列高度同源。反转录PCR和实时荧光定量PCR检测结果显示,tsn的mRNA在野生型青鳉多个组织中广泛表达,其中在精巢中的表达量显著高于卵巢。用免疫荧光检测发现,gsdf~(-/- )XY卵巢中抗青鳉Tsn抗体阳性反应的囊性生殖细胞异常增多,同蛋白组学分析得到的gsdf~(-/- )XY卵巢中Tsn蛋白表达量高于gsdf~(+/+)XX卵巢的结果相一致。本研究表明,在青鳉性腺分化发育过程中,Gsdf信号可能抑制Tsn阳性的雄性囊性生殖细胞增殖,当该信号被破坏后,这种抑制作用消失,导致Tsn阳性生殖细胞在gsdf~(-/-) XY卵巢中大量积累。青鳉Tsn阳性生殖细胞的囊性增殖,是青鳉有丝分裂期生殖细胞雄性分化的特征之一,为脊椎动物有丝分裂期生殖细胞的雌雄性别鉴定提供了线索。
【关键词】gsdf tsn 生殖细胞 性别分化 卵巢 青鳉
【基金】国家自然科学基金(81771545)
【所属期刊栏目】上海海洋大学学报
文献传递