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大豆GmVE2基因克隆及其在大豆籽粒维生素E动态积累中的表达分析

2020-06-28分类号:S565.1

【作者】王伟  王俊  鲍玉月  栗春霞  崔智慧  韩英鹏  李文滨  
【部门】东北农业大学大豆研究所大豆生物学教育部重点实验室农业部东北大豆生物学与遗传育种重点实验室  
【摘要】大豆GmVE2基因是一种NAD(P)H脱氢酶,主要存在于高等植物叶绿体类囊体膜上,可参与氧化应激反应以及叶绿体PSⅠ电子循环传递。为了探究其功能,通过RT-PCR方法从东农50中克隆获得GmVE2基因的CDS全长序列。利用ExPASy-ProtParam等在线软件对GmVE2蛋白序列进行理化性质分析,预测结果表明,GmVE2基因编码区共编码167个氨基酸,分子式为C_(904)H_(1326)N_(208)O_(246)S_(10),分子质量为19.364 3 ku,总原子数为2 694,理论等电点(pI)为4.78,脂肪指数为87.01;蛋白正负电荷残基数分别为11和23;GmVE2蛋白的不稳定系数和GRAVY值分别为25.02和0.043,说明该蛋白是稳定的疏水性蛋白;蛋白存在跨膜结构、信号肽和磷酸化位点。将线性植物表达载体与目的片段进行连接,成功构建pCambia3300-GmVE2植物表达载体。通过qRT-PCR技术和高效液相色谱(HPLC)分别对动态籽粒及组织基因表达量和维生素E含量进行测定,结果表明,该基因表达量与生育期籽粒维生素E含量呈负相关(-0.951~*),且维生素E含量在绿色组织中显著高于其他组织。本研究对大豆基因GmVE2与维生素E含量的调控关系进行初步研究,为高大豆维生素E含量的大豆新品种选育提供理论和实践基础,为后期研究GmVE2基因功能提供科学依据。
【关键词】大豆  维生素E  GmVE2基因  基因克隆  功能预测  表达分析
【基金】国家科技重大专项和重点研发项目(课题)省级资助项目(GX17B002);; 国家自然基金面上项目(31671717);; 黑龙江省杰出青年基金项目(JC2018007);; 黑龙江省博士后项目(LBH-Q17015)
【所属期刊栏目】华北农学报
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